Testverfahren

Film zum Testverfahrens (Flash-Movie; externer Link)

Allgemeines:

• Reagenzien auf Raumtemperatur bringen.
• Bei Testbeginn muss der Starter Raumtemperatur haben
• Test ohne Unterbrechung durchführen.
• Trägermembran während des Tests nicht austrocknen lassen!
• Aufbringen der Reagenzien im Bereich der Lücke, zwischen Membran und Stripwanne.

Hund / Katze:

1. Strip kurz mit Waschpuffer befeuchten und auf Papiertüchern ausklopfen.
2. Die Membran kurz vor Aufbringen der Probe mit 250 µl Starterlösung überschichten und 5 Minuten inkubieren. Auf Papiertüchern vorsichtig ausklopfen.
3. 200 µl Serum direkt nach dem Anfeuchten in die Vertiefung neben die Membran pipettieren. 60 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, dabei konstant mit ca. 30 rpm schütteln. Probe ablaufen lassen, die Membran 3 mal mit ca. 1 ml Waschpuffer liegend waschen (ca. 1 ml Waschpuffer entspricht einer gut gefüllten Stripwanne); anschließend gut auf Papiertüchern ausklopfen.
4. 250 µl Waschpuffer in die Vertiefung neben die Membran pipettieren. 5 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, dabei konstant mit ca. 30 rpm schütteln. Membran wie in Schritt 2 beschrieben waschen.
5. 250 µl Nachweisantikörper in die Vertiefung neben die Membran pipettieren. 90 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, dabei konstant mit ca. 30 rpm schütteln. Membran wie in Schritt 2 beschrieben waschen.
6. 250 µl Streptavidin-Konjugat in die Vertiefung neben die Membran pipettieren. 20 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, dabei konstant mit ca. 30 rpm schütteln. Membran wie in Schritt 2 beschrieben waschen.
7. 250 µl Substratlösung (BCIP/NBT) in die Vertiefung neben die Membran pipettieren. Im Dunkeln (i.e. Abdecken mit Alufolie oder durch lichtundurchlässigen Deckel) 20 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, dabei konstant mit ca. 30 rpm schütteln. Membran wie in Schritt 2 beschrieben waschen.
   (Gesamtzeit 200 Minuten)
8. Membran gut trocknen lassen und den Strip auswerten.

Pferd:

1. Strip kurz mit Waschpuffer befeuchten und auf Papiertüchern ausklopfen.
2. Die Membran kurz vor Aufbringen der Probe mit 250 µl Starterlösung überschichten und 5 Minuten inkubieren. Auf Papiertüchern vorsichtig ausklopfen.
3. 250 µl Serum direkt nach dem Anfeuchten in die Vertiefung neben die Membran pipettieren. 90 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, dabei konstant mit ca. 30 rpm schütteln. Probe ablaufen lassen, die Membran 3 mal mit ca. 1 ml Waschpuffer liegend waschen (ca. 1 ml Waschpuffer entspricht einer gut gefüllten Stripwanne); anschließend gut auf Papiertüchern ausklopfen.
4. 250 µl Waschpuffer in die Vertiefung neben die Membran pipettieren. 5 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, dabei konstant mit ca. 30 rpm schütteln. Membran wie in Schritt 2 beschrieben waschen.
5. 250 µl 1. Nachweisantikörper in die Vertiefung neben die Membran pipettieren. 90 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, dabei konstant mit ca. 30 rpm schütteln. Membran wie in Schritt 2 beschrieben waschen.
6. 250 µl 2. Nachweisantikörper in die Vertiefung neben die Membran pipettieren. 60 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, dabei konstant mit ca. 30 rpm schütteln. Membran wie in Schritt 2 beschrieben waschen.
7. 250 µl Streptavidin-Konjugat in die Vertiefung neben die Membran pipettieren. 20 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, dabei konstant mit ca. 30 rpm schütteln. Membran wie in Schritt 2 beschrieben waschen.
8. 250 µl Substratlösung (BCIP/NBT) in die Vertiefung neben die Membran pipettieren. Im Dunkeln (d.h. Abdecken mit Alufolie oder durch lichtundurchlässigen Deckel) 20 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, dabei konstant mit ca. 30 rpm schütteln. Membran wie in Schritt 2 beschrieben waschen.
   (Gesamtzeit 290 Minuten)
9. Membran gut trocknen lassen und den Strip auswerten.